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在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所期間，開始了自己的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，在本實(shí)驗(yàn)室第一個(gè)完成了大腸桿菌缺失株的構(gòu)建。飼養(yǎng)過SPF級的雞，并進(jìn)行了疫苗的免疫，以及后續(xù)疫苗的評價(jià)。多次進(jìn)行蛋白的表達(dá)，純化，多抗的制備以及相關(guān)蛋白功能的驗(yàn)證。精通載體構(gòu)建，細(xì)胞培養(yǎng)，western blot,熒光染色，RNA提取，Real-time PCR。經(jīng)常進(jìn)行鴨的LD50毒力試驗(yàn)，以及臟器細(xì)菌分離等。在實(shí)驗(yàn)室期間經(jīng)常學(xué)習(xí)本實(shí)驗(yàn)室其他同學(xué)的試驗(yàn)，了解單抗的制備，流式細(xì)胞術(shù)，細(xì)菌疫苗的研制及評價(jià)，二維電泳，細(xì)胞因子檢測，cDNA文庫的構(gòu)建，蛋白互作，酵母雙雜交等技術(shù)。此外，在實(shí)驗(yàn)室期間還主管試劑的訂購和接收，經(jīng)常與各種公司的銷售員技術(shù)員交流。三年時(shí)間給自己積累了豐富的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和人際交往經(jīng)驗(yàn)。

畢業(yè)結(jié)束聯(lián)合培養(yǎng)

1.禽致病性大腸桿菌AI-2的檢測及其因素分析
利用哈維弧菌BB170 對APEC 是否產(chǎn)生信號分子AI-2進(jìn)行檢測。
本研究利用哈維弧菌BB170檢測不同生長時(shí)期和不同培養(yǎng)條件下APEC的AI-2活性。同時(shí)利用Real-time PCR檢測APEC不同生長時(shí)期和不同培養(yǎng)條件下luxS和pfs的轉(zhuǎn)錄水平。
2. 禽致病性大腸桿菌AI-2的合成及其對生物被膜的影響
通過對APEC的luxS和pfs基因的克隆、表達(dá)和純化，成功獲得了可用于AI-2體外合成的可溶性重組蛋白LuxS和Pfs。
利用純化后的LuxS、Pfs與S-腺苷同型半胱氨酸同時(shí)體外催化作用后，成功獲得信號分子AI-2。
本研究采用改良結(jié)晶紫半定量法和熒光染色法檢測AI-2對APEC生物被膜形成能力的影響。
3.禽致病性大腸桿菌luxS缺失株的構(gòu)建及致病性分析
為進(jìn)一步研究該系統(tǒng)對APEC的調(diào)控作用，本研究構(gòu)建了APEC的luxS的缺失株。對野生株和缺失株的AI-2活性，運(yùn)動(dòng)性，細(xì)胞的黏附和入侵性，毒力基因的轉(zhuǎn)錄水平，動(dòng)物的致病性進(jìn)行了檢測。